近年來，接受CAR-T療法的患者中，有些出現(xiàn)一種罕見的反?，F(xiàn)象，在治療的幾周后，患者病情緩解，但是突然出現(xiàn)記憶失常甚至死亡，背后的原因竟是常見的人皰疹病毒-6型（HHV-6）感染導(dǎo)致腦炎所致。

正常情況下，HHV-6潛伏在人體內(nèi)，與人類和平相處。這些HHV-6是從哪來，又為何會(huì)導(dǎo)致這些并發(fā)癥呢？美國念斯隆·凱特琳癌癥中心Lareau等研究發(fā)現(xiàn)，在CAR-T細(xì)胞中存在具有很高病毒轉(zhuǎn)錄活性的HHV-6“超級表達(dá)者”群體，大約每300~10 000個(gè)CAR-T細(xì)胞中，就會(huì)出現(xiàn)一個(gè)這樣的“超級表達(dá)者”CAR-T細(xì)胞。

在分析接受FDA批準(zhǔn)或處于臨床研究階段的CAR-T細(xì)胞治療的患者的單細(xì)胞測序數(shù)據(jù)后，研究者證實(shí)這些患者體內(nèi)存在HHV-6“超級表達(dá)者”CAR-T細(xì)胞。基于這一研究結(jié)果，研究者認(rèn)為，CAR-T細(xì)胞中重新被激活的HHV-6可能是CAR-T治療后HHV-6感染的來源之一。

HHV-6感染在人群中十分普遍，90%的人初次感染HHV-6發(fā)生在嬰兒期，隨后HHV-6進(jìn)入漫長的潛伏期，穩(wěn)定存在于健康人體內(nèi)。雖然嬰兒期原發(fā)性HHV-6感染很少引起并發(fā)癥，但成年后HHV-6的再激活可導(dǎo)致包括腦炎在內(nèi)的嚴(yán)重疾病。對于化療等情況導(dǎo)致的免疫力低下人群，HHV-6的再激活甚至?xí)?dǎo)致死亡。

在之前的研究中，研究者已發(fā)現(xiàn)HHV-6有可能在T細(xì)胞中重新激活，當(dāng)他們注意到2022年發(fā)表在《新英格蘭醫(yī)學(xué)雜志》上的病例報(bào)告后，研究者猜測可能是CAR-T細(xì)胞中的HHV-6再激活，導(dǎo)致了CAR-T細(xì)胞治療之后的腦炎。

在研究CAR-T細(xì)胞之前，研究者先基于已有數(shù)據(jù)庫，了解了已知具有潛伏復(fù)制周期并能在體內(nèi)重新激活的多種病毒在T細(xì)胞中的再激活情況，結(jié)果發(fā)現(xiàn)HHV-6激活程度最高。隨后，又通過體外培養(yǎng)T細(xì)胞，證實(shí)了HHV-6確可在T細(xì)胞中重新激活。

研究者隨后研究了4名捐獻(xiàn)者的CAR-T細(xì)胞。在培養(yǎng)的過程中，研究者發(fā)現(xiàn)HHV-6激活現(xiàn)象，并證實(shí)隨著時(shí)間的推移，HHV-6核酸在T細(xì)胞中會(huì)變得越來越多。這種現(xiàn)象與病毒再激活一致。實(shí)驗(yàn)結(jié)果還表明，HHV-6的再激活不是在CAR-T細(xì)胞中均勻地展開，而只有一部分CAR-T細(xì)胞在最開始出現(xiàn)HHV-6再激活，研究者把這部分細(xì)胞稱作“超級表達(dá)者”?？偟膩砜矗诓煌幕颊唧w內(nèi)，大約有0.01%~0.3%的細(xì)胞（360~10 000
個(gè)細(xì)胞中的1個(gè)）重新激活或高水平表達(dá)HHV-6轉(zhuǎn)錄本。

在將T細(xì)胞擴(kuò)增時(shí)間延到25天和/或27天后，研究者發(fā)現(xiàn)，與培養(yǎng)的第20天相比，HHV-6轉(zhuǎn)錄本的豐度增加了約1200~2000倍，49%和62%的T細(xì)胞（包括CD4或CD8陽性）都成了HHV-6“超級表達(dá)者”，這表明發(fā)生了裂解再激活和病毒擴(kuò)散。

是否是CAR-T制作過程導(dǎo)致HHV-6再激活呢，答案是否定的。在重現(xiàn)CAR-T制作工藝的19天里（標(biāo)準(zhǔn)流程時(shí)間），研究者未觀察到HHV-6激活。于是，研究者基于自己的研究數(shù)據(jù)提出了一個(gè)模型，在這一模型中，HHV-6的再激活是一個(gè)隨機(jī)事件，可能受細(xì)胞培養(yǎng)過程中各種因素和宿主細(xì)胞內(nèi)在差異的影響。

在接受FDA批準(zhǔn)等CAR-T細(xì)胞治療的患者隊(duì)列中，研究者注意到，給患者回輸前的CAR-T細(xì)胞中，沒有HHV-6激活，但是在回輸后的CAR-T樣本中，發(fā)現(xiàn)了HHV-6的激活。在將1例患者回輸前的CAR-T細(xì)胞額外培養(yǎng)兩周的時(shí)間里，研究者發(fā)現(xiàn)，在額外培養(yǎng)的5~14天能持續(xù)檢測到HHV-6的激活。

基于這些數(shù)據(jù)，研究者認(rèn)為，在CAR-T細(xì)胞產(chǎn)品制成后的2~3周期間，可在體外或體內(nèi)檢測到HHV-6的激活。也就是說，CAR-T細(xì)胞培養(yǎng)的時(shí)間，是HHV-6激活的關(guān)鍵。這一結(jié)論，也被培養(yǎng)時(shí)間較長的異體CAR-T細(xì)胞證實(shí)。

研究者發(fā)現(xiàn)，有一例患者曾使用膦甲酸（Foscarnet）控制HHV-6感染，并取得較好的效果。研究者探討了在CAR-T細(xì)胞生產(chǎn)過程中加入膦甲酸是否可抑制HHV-6的激活和擴(kuò)散，結(jié)果發(fā)現(xiàn)膦甲酸確可大幅降低HHV-6激活水平，且?guī)缀醪挥绊慍AR-T細(xì)胞的狀態(tài)。研究者認(rèn)為，未來研究有必要探索膦甲酸的最佳用量、使用時(shí)間等，以期抑制CAR-T細(xì)胞中HHV-6的激活。

該研究表明，在初始T細(xì)胞和CAR-T細(xì)胞中，均存在HHV-6再激活現(xiàn)象。HHV-6的再激活與CAR無關(guān)，而是與T細(xì)胞的活化、增殖和培養(yǎng)時(shí)間長短有關(guān)，且有裂解活性的HHV-6會(huì)隨著時(shí)間的推移而增加。雖然發(fā)現(xiàn)了HHV-6再激活現(xiàn)象，但CAR-T療法的臨床應(yīng)用仍應(yīng)支持，治療過程中出現(xiàn)的HHV-6感染導(dǎo)致的腦炎是可治的，并且這種HHV-6再激活導(dǎo)致的腦炎并不常見，而CAR-T療法是可挽救患者生命的革命性療法。雖然目前沒有規(guī)定在輸注前對細(xì)胞治療產(chǎn)品進(jìn)行潛在病毒檢測，但未來希望能有相關(guān)檢測，以期預(yù)防不良事件的發(fā)生，進(jìn)一步改善患者預(yù)后。

（編譯 張娜）