中國香港中文大學(xué)于君教授等發(fā)現(xiàn)，YTHDF1在胃癌中過表達(dá)，并通過誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞增殖和抑制樹突狀細(xì)胞介導(dǎo)的抗腫瘤免疫反應(yīng)促進(jìn)胃癌進(jìn)展。YTHDF1缺失可促進(jìn)腫瘤細(xì)胞中干擾素受體1(IFNGR1)和JAK-STAT1信號通路過表達(dá)，從而增加抗腫瘤免疫的敏感性，YTHDF1有望成為胃癌免疫治療新靶點(diǎn)。(J Immunother Cancer. 2022, 10: e003663. DOI: 10.1136/jitc-2021-003663)

研究者收集2015~2018年在威爾士親王醫(yī)院確診的胃癌患者組織樣本101例組成隊(duì)列1，用于檢測YTHDF1 mRNA表達(dá)情況，收集1998~2006年確診的胃癌患者組織樣本278例組成隊(duì)列2，用于檢測YTHDF1蛋白表達(dá)水平。從TCGA數(shù)據(jù)庫中選取胃癌患者腫瘤組織樣本和癌旁正常組織樣本(其中未配對組：癌旁正常組織32例，腫瘤組織375例;配對組：同一患者的腫瘤組織和癌旁正常組織各27例)，分析胃癌患者腫瘤組織和癌旁正常組織中mRNA相關(guān)基因表達(dá)情況。

結(jié)果顯示，無論是配對組還是在未配對組的腫瘤組織，均觀察到Y(jié)THDF1表達(dá)上調(diào)現(xiàn)象。在威爾士親王醫(yī)院收集的隊(duì)列1和隊(duì)列2的胃癌患者組織樣本中，YTHDF1 mRNA水平和YTHDF1蛋白水平在胃癌患者的腫瘤組織中均出現(xiàn)過表達(dá)。在隊(duì)列1中，YTHDF1 高mRNA表達(dá)與胃癌患者的低生存率顯著相關(guān);多變量Cox回歸分析中，YTHDF1 高mRNA表達(dá)是胃癌患者的獨(dú)立不良預(yù)后因素。在隊(duì)列2中，YTHDF1蛋白過表達(dá)與胃癌患者的低生存率相關(guān)。

研究者檢測了12種人胃癌細(xì)胞株中YTHDF1蛋白的表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)YTHDF1蛋白在三種人胃癌細(xì)胞系A(chǔ)GS、BGC823、MKN74中表達(dá)相對較高。研究者選取這三個(gè)細(xì)胞系進(jìn)行YTHDF1基因敲降，發(fā)現(xiàn)YTHDF1敲降顯著抑制AGS、BGC823、MKN74細(xì)胞增殖。對小鼠胃癌細(xì)胞系YTN16進(jìn)行YTHDF1基因敲除，也觀察到類似現(xiàn)象。功能試驗(yàn)顯示，YTHDF1敲降/敲除可顯著抑制人和小鼠胃癌細(xì)胞的增殖和集落形成能力。

體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，YTHDF1有明顯促癌作用。為了探索YTHDF1在體內(nèi)是否也有同樣的促癌作用，研究者分別將轉(zhuǎn)染空白質(zhì)粒的MKN74細(xì)胞(MKN74-shNC)和敲降YTHDF1表達(dá)的兩個(gè)穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系MKN74-shYTHDF1-1和MKN74-shYTHDF1-2分別接種到小鼠皮下。

與接種MKN74-shNC的小鼠相比，接種MKN74-shYTHDF1-1和MKN74-shYTHDF1-2的小鼠，皮下腫瘤的大小和重量均明顯減小。這在接種轉(zhuǎn)染空白質(zhì)粒的YTN16-sgNC細(xì)胞和YTHDF1基因敲除(YTN16-sgYTHDF1-1和YTN16-sgYTHDF1-2)細(xì)胞的小鼠中得到進(jìn)一步驗(yàn)證。

體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)表明，YTHDF1可明顯促進(jìn)胃癌細(xì)胞增殖。RNA測序分析顯示，在YTHDF1基因敲除細(xì)胞中，有575個(gè)基因表達(dá)上調(diào)，866個(gè)基因表達(dá)下調(diào)?；蚋患治鼋沂?，YTHDF1基因敲除細(xì)胞中免疫調(diào)節(jié)途徑基因的缺失，包括CTLA-4檢查點(diǎn)通路和CD209 DC通路。使用KEGG數(shù)據(jù)庫進(jìn)行基因富集分析發(fā)現(xiàn)，在YTHDF1基因敲除細(xì)胞中JAK-STAT信號通路基因表達(dá)上調(diào)，T細(xì)胞受體信號通路基因表達(dá)下調(diào)，提示YTHDF1可能在體內(nèi)發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用。

研究者使用具有免疫活性的同源小鼠模型C57BL/6小鼠，在其皮下分別接種YTN16-sgNC細(xì)胞和YTHDF1基因敲除細(xì)胞。在整個(gè)持續(xù)6周的實(shí)驗(yàn)過程中，接種YTN16-sgNC細(xì)胞的小鼠腫瘤持續(xù)增長，接種YTHDF1基因敲除細(xì)胞的小鼠在接種1周后皮下雖均有腫瘤長出，但接種YTN16-sgYTHDF1-1的小鼠皮下腫瘤在2周后開始逐漸縮小，說明YTHDF1的促癌作用部分依賴于功能正常的免疫系統(tǒng)。

在C57BL/6小鼠身上分別接種YTN16-sgNC細(xì)胞和YTHDF1基因敲除細(xì)胞，在2周后收集腫瘤，通過流式細(xì)胞術(shù)檢測腫瘤微環(huán)境中的免疫細(xì)胞浸潤情況。與接種YTN16-sgNC細(xì)胞相比，接種YTHDF1基因敲除細(xì)胞的小鼠腫瘤大小和重量都有明顯減少。流式細(xì)胞儀分析顯示，YTHDF1基因敲除組的腫瘤組織中浸潤性免疫細(xì)胞(CD45+細(xì)胞)比例明顯高于YTN16-sgNC組。YTHDF1基因敲除組腫瘤組織中，CD3+細(xì)胞和CD45+細(xì)胞比例顯著高于YTN16-sgNC組，且在浸潤性免疫細(xì)胞中，CD4+T細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞數(shù)量和占比也均高于YTN16-sgNC組。與YTN16-sgNC組腫瘤組織相比，YTHDF1基因敲除組腫瘤組織中的IFNγ顯著升高。YTHDF1缺失使IFNGR1、JAK1、JAK2和STAT1蛋白表達(dá)上調(diào)。表明YTHDF1基因敲除使IFNGR1上調(diào)進(jìn)一步激活JAK-STAT1通路，從而增強(qiáng)腫瘤免疫監(jiān)視。腫瘤細(xì)胞中YTHDF1缺失可誘導(dǎo)成熟DC的募集，促進(jìn)CD4+T細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞的浸潤，并增加細(xì)胞毒性細(xì)胞因子IL-12分泌。

該研究表明，YTHDF1在胃癌中過表達(dá)，并發(fā)揮促癌作用，YTHDF1缺失誘導(dǎo)DC細(xì)胞募集，增加MHCII表達(dá)和IL-12分泌，進(jìn)而促進(jìn)CD4+T和CD8+T細(xì)胞浸潤，增加干擾素γ分泌;YTHDF1缺失介導(dǎo)腫瘤細(xì)胞中IFNGR1和JAK-STAT1信號通路過表達(dá)，這可能有助于恢復(fù)抗腫瘤免疫的敏感性，研究為胃癌的免疫治療提供了一種新策略，YTHDF1或有望成為胃癌免疫治療的新靶點(diǎn)。

(編譯 張楠)