美國耶魯大學陳斯迪團隊專注于利用基于CRISPR技術(shù)的方法，進行基因組的編輯和高通量篩選，繼找到導致腦瘤的致命基因突變后，研究者用新開發(fā)的一款新型CRISPR篩選系統(tǒng)，對T細胞進行了全基因組水平的編輯和高通量篩選，發(fā)現(xiàn)了調(diào)控T細胞活性的基因以及可能的免疫治療新靶點。(Cell. 2019; 178: 1189-1204.e23. doi: 10.1016/j.cell.2019.07.044.)

研究者首先從小鼠中分離出CD8陽性免疫T細胞，使用CRISPR技術(shù)對其進行全基因組水平編輯。經(jīng)編輯的T細胞在短暫培養(yǎng)后，輸注回帶有腫瘤的小鼠體內(nèi)。一些小鼠的腫瘤獲得緩解，提示輸注進小鼠體內(nèi)的免疫T細胞發(fā)揮了抗擊腫瘤的效果。

研究者取出小鼠的腫瘤，并對腫瘤環(huán)境中的T細胞進行了分析，看哪些基因在CRISPR技術(shù)編輯下發(fā)生了改變。除了PD-1和Tim-3等已知的經(jīng)典靶點，研究者還發(fā)現(xiàn)了Dhx37等新靶點。

Dhx37基因編碼的是RNA解旋酶，一旦T細胞內(nèi)該基因被敲除，T細胞就會在體內(nèi)顯示有力的抗腫瘤活性。研究者使用的是三陰性乳腺癌的疾病模型，在這種極為難治的腫瘤中顯示抗腫瘤活性難能可貴。

后續(xù)研究證實，Dhx37編碼的蛋白的確會抑制T細胞的激活、細胞因子的產(chǎn)生以及細胞毒性。去掉Dhx37這一免疫系統(tǒng)的“剎車”，T細胞便會瘋狂地攻擊腫瘤。

研究者通過轉(zhuǎn)錄組分析和生化研究，發(fā)現(xiàn)Dhx37在一定程度上通過NF-κB發(fā)揮作用，這也提供了一個潛在的機制模型。

研究者指出，這些結(jié)果表明了其CRISPR系統(tǒng)在高通量篩選免疫療法靶點上的有效性。PD-1與Tim-3在篩選結(jié)果中具有較高的評分，也表明了這套篩選系統(tǒng)的可靠。對于新篩選出的潛在靶點Dhx37蛋白，由于尚無針對它的小分子化合物，因此通過體外進行基因編輯，削弱其活性，有望成為設計新型免疫療法的一種思路。在Dhx37之外，研究團隊們也正在探索其他篩選出的基因的抗腫瘤潛力。針對這些靶點的新型免疫療法也正在開發(fā)中。

(編譯 孫藝榕)