美國(guó)斯坦福大學(xué)Spiegel等開(kāi)發(fā)了靶向CD19和CD22的雙特異CAR-T細(xì)胞(CAR19-22)，用以治療復(fù)發(fā)或難治的B-ALL以及大B細(xì)胞淋巴瘤(LBCL)患者，報(bào)告的Ⅰ期臨床試驗(yàn)結(jié)果顯示，CAR19-22治療B-ALL和LBCL安全可行。(Nat Med. 2021年7月26日在線版)

靶向CD19的CAR-T細(xì)胞療法(CAR19)對(duì)于B細(xì)胞惡性腫瘤療效顯著，然而在接受CAR19治療后過(guò)半數(shù)患者疾病進(jìn)展。在接受CAR19治療的B細(xì)胞型急性淋巴細(xì)胞白血病(B-ALL)患者中，30%~95%疾病進(jìn)展的患者可檢測(cè)到腫瘤細(xì)胞表面CD19抗原表達(dá)減少或消失(CD19逃逸)。由于CAR-T細(xì)胞療法的療效與靶抗原密度息息相關(guān)，靶抗原的減少或消失可能是造成CAR-T細(xì)胞治療抵抗的原因之一。

較多研究已證實(shí)，CD19逃逸在B-ALL患者中可造成CAR19治療抵抗，但在LBCL患者中相關(guān)研究較少。研究者用免疫組化(IHC)方法檢測(cè)了44例接受CAR19治療的LBCL患者CAR19治療前活檢組織CD19表達(dá)(CD19 H-score>150為表達(dá)陽(yáng)性，否則為陰性)。

分析發(fā)現(xiàn)，89%(39/44)的患者在接受CAR19治療前CD19表達(dá)陽(yáng)性(CD19+)，而在16例接受CAR19治療后疾病進(jìn)展患者的活檢組織中，該比例為37.5%(6/16)。這16例患者中，15例患者具有配對(duì)的CAR19治療前后的IHC數(shù)據(jù)，因此研究人員對(duì)相關(guān)數(shù)據(jù)進(jìn)行了比較，結(jié)果發(fā)現(xiàn)60%(9/15)的患者從治療前的CD19+變?yōu)镃D19-。

研究者分析CAR19治療前CD19 H-score能否預(yù)測(cè)患者治療后疾病進(jìn)展，發(fā)現(xiàn)治療前CD19 H-score不能預(yù)測(cè)CAR19治療有效性。

研究者通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)定量分析治療前CAR19表達(dá)情況與患者對(duì)CAR19治療反應(yīng)的關(guān)系。分析發(fā)現(xiàn)，CD19表達(dá)較低的患者具有較高的CAR19治療后疾病進(jìn)展風(fēng)險(xiǎn)，CD19-(每個(gè)細(xì)胞平均表達(dá)CD19<3000)的4例患者中，有3例在CAR19治療后疾病發(fā)生進(jìn)展，而CD19+的11例患者中，僅1例疾病發(fā)生進(jìn)展。

這些研究結(jié)果表明，腫瘤細(xì)胞表面CD19的表達(dá)密度與CAR19治療效果相關(guān)，且CD19逃逸是造成CAR19治療抵抗的潛在機(jī)制。為了解決CD19逃逸造成的CAR19治療抵抗問(wèn)題，研究者構(gòu)建了CAR19-22雙靶抗原CAR-T細(xì)胞，并在體外實(shí)驗(yàn)及動(dòng)物模型中驗(yàn)證了該CAR-T細(xì)胞的有效性。

在此基礎(chǔ)上，研究者開(kāi)展了CAR19-22治療復(fù)發(fā)或難治性的B-ALL和LBCL患者的Ⅰ期臨床研究，主要研究終點(diǎn)為療法可行性與安全性。細(xì)胞治療劑量分為兩個(gè)等級(jí)：DL1是1×106 /kg，DL2是3×106 /kg。研究使用了“3+3”的升階梯療法(3次DL1，3次DL2)。

共39例患者納入臨床研究：B-ALL組17例，LBCL組22例(LBCL組中1例患者在淋巴清除時(shí)因疾病進(jìn)展和膿毒癥而死亡)。經(jīng)過(guò)制造工藝的改進(jìn)，最后生產(chǎn)的CAR19-22細(xì)胞100%達(dá)到了質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)，97%的產(chǎn)品達(dá)到了預(yù)先制定的劑量標(biāo)準(zhǔn)。

76%(29/38)的患者出現(xiàn)了不同程度的細(xì)胞因子釋放綜合征(CRS)，2例患者發(fā)生≥3級(jí)CRS;37%(14/38)的患者(LBCL9例，B-ALL5例)出現(xiàn)神經(jīng)毒性癥狀，4例患者發(fā)生≥3級(jí)的神經(jīng)毒性癥狀;經(jīng)過(guò)相應(yīng)治療后，所有出現(xiàn)CRS和神經(jīng)毒性癥狀的患者均得到緩解。還有2例患者有巨噬細(xì)胞激活綜合征的實(shí)驗(yàn)室證據(jù)，并發(fā)了≥3級(jí)神經(jīng)毒性癥狀，因此接受大劑量皮質(zhì)類固醇和阿那白滯素治療。

CAR19-22細(xì)胞在輸注后10~14天在體內(nèi)達(dá)到峰值，LBCL組和B-ALL組患者之間，及不同細(xì)胞劑量患者之間的細(xì)胞峰值擴(kuò)增倍數(shù)無(wú)顯著差異。在接受DL2劑量治療的15例LBCL患者中，3個(gè)月時(shí)的客觀緩解率(ORR)和完全緩解(CR)率分別為40%和33%。

所有(21例)LBCL患者中，隨訪過(guò)程中最佳的ORR和CR分別為62%和29%。中位隨訪10個(gè)月，患者中位生存時(shí)間為22.5個(gè)月，中位無(wú)進(jìn)展生存期為3.2個(gè)月。B-ALL患者28天ORR為100%，82%(14/17)獲得完全緩解，6個(gè)月時(shí)CR率為88%。在中位隨訪9.3個(gè)月，中位生存期為11.8個(gè)月，中位無(wú)進(jìn)展生存期為5.8個(gè)月。

CAR19-22治療后腫瘤細(xì)胞CD19表達(dá)下降而CD22表達(dá)不變，研究者推測(cè)是因?yàn)镃AR19-22 T細(xì)胞靶向CD19產(chǎn)生的免疫效應(yīng)遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過(guò)靶向CD22。

該研究證實(shí)了CD19逃逸是CAR19治療抵抗的重要原因，并探索了雙靶抗原的CAR19-22 T細(xì)胞用于治療難治或復(fù)發(fā)的B細(xì)胞惡性腫瘤的可行性與安全性，初步分析顯示該細(xì)胞療法具有良好的可行性與安全性，臨床治療效果令人期待。 (編譯 余新)