美國(guó)哈佛大學(xué)醫(yī)學(xué)院劉小樂教授研究團(tuán)隊(duì)采用文庫(kù)篩選方式，對(duì)三陰性乳腺癌治療靶點(diǎn)進(jìn)行地毯式搜索，構(gòu)建的CRISPR/Cas9敲除文庫(kù)MusCK可靶向4500個(gè)小鼠基因，這些基因與腫瘤發(fā)生發(fā)展和免疫調(diào)控相關(guān)。(Cell. 2021年9月20日在線版 DOI: 10.1016/j.cell.2021.09.006)

三陰性乳腺癌缺乏相應(yīng)激素受體，常規(guī)治療療效不理想，免疫療法成為新的研究方向。2019年FDA批準(zhǔn)首個(gè)用于治療三陰性乳腺癌的免疫療法阿替利珠單抗，療效也僅限于部分患者，提示仍需尋找其他治療靶點(diǎn)。腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞(TAM)是一個(gè)研究關(guān)注點(diǎn)。TAM存在于腫瘤微環(huán)境，可促進(jìn)血管生成和腫瘤生長(zhǎng)，扎到影響TAM的信號(hào)靶點(diǎn)或有助于尋找新的治療。

體外實(shí)驗(yàn)顯示，研究者構(gòu)建的CRISPR/Cas9敲除文庫(kù)能很好地敲除相關(guān)癌基因，在小鼠三陰性乳腺癌細(xì)胞系4T1中引入該文庫(kù)，將感染了文庫(kù)的4T1細(xì)胞注射到小鼠乳腺脂肪墊內(nèi)成瘤。

16天后收集腫瘤細(xì)胞進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)缺乏T細(xì)胞的小鼠腫瘤體積最大，有小鼠4T1細(xì)胞過表達(dá)增強(qiáng)免疫活性的卵白蛋白，這些小鼠腫瘤體積最小。比較兩類腫瘤中sgRNA敲除情況，研究者發(fā)現(xiàn)了一些與4T1細(xì)胞侵襲性相關(guān)的關(guān)鍵基因，如干擾素γ通路相關(guān)基因的敲除，與腫瘤體積縮小有關(guān)。

將首次篩選出的79個(gè)候選基因構(gòu)建成文庫(kù)2.0版本進(jìn)行二輪篩選，IFNγ信號(hào)通路中的E3泛素化連接酶編碼基因Cop1成為關(guān)注對(duì)象，因其在腫瘤體積最小的小鼠內(nèi)幾乎完全被敲除了。

與對(duì)照組相比，Cop1敲除的小鼠不僅腫瘤進(jìn)展減緩，存活期也得到延長(zhǎng)。Cop1表達(dá)下調(diào)可明顯減少腫瘤內(nèi)引誘巨噬細(xì)胞的化學(xué)物質(zhì)，導(dǎo)致腫瘤內(nèi)浸入的巨噬細(xì)胞數(shù)量明顯減少，TC1腫瘤體積也縮小。Cop1敲除后下游底物C/ebpδ的泛素化程度下降，直接導(dǎo)致其表達(dá)量激增。C/ebpδ能抑制巨噬細(xì)胞相關(guān)趨化因子轉(zhuǎn)錄，減少巨噬細(xì)胞進(jìn)入腫瘤的可能性。

這些研究發(fā)現(xiàn)有望為該領(lǐng)域研究帶來更多新的靶點(diǎn)藥物，為難治性乳腺癌患者帶來新的希望。 (編譯 王可)