荷蘭Radboud大學Schuurbiers等報告的研究顯示，血液腫瘤突變負荷(bTMB)或可用于篩選免疫療法患者的生物標志物，高bTMB值與腫瘤突變負荷(tTMB)強相關(guān)，低bTMB可能是疾病早期較低腫瘤負荷或脫落較少所致，對于較晚期腫瘤，bTMB預測敏感性媲美tTMB，即使少于600 kb也有較高的預測效能，提示bTMB可作為篩選免疫療法患者的可用標志物。(J Immunother Cancer. 2022, 10: e004064. DOI: 10.1136/jitc-2021-004064)

腫瘤突變負荷已被作為篩選免疫治療優(yōu)勢人群的生物標志物，高TMB腫瘤產(chǎn)生更多新抗原，引發(fā)更強的抗腫瘤免疫反應(yīng)。FoundationOne CDx(F1CDx)已獲FDA批準用于帕博利珠單抗治療人群的篩選。bTMB或可彌補腫瘤突變負荷檢測的有創(chuàng)和樣本量及并發(fā)癥等不足，成為較好的TMB檢測標志物。但測序深度使得bTMB費用較高且容易得到假陰性結(jié)果。研究者設(shè)計了小型bTMB檢測譜，探討其檢測效能及與tTMB的相關(guān)性等。

研究者使用LEMA試驗(NCT02894853)中收集的全血標本，185例未接受治療的Ⅰ~Ⅳ期NSCLC患者標本用設(shè)計的TMB檢測panel進行了檢測。結(jié)果顯示，1.1Mb的TMB panel顯示較高的TMB檢測準確性，tTMB界值為16 mut/Mb和bTMB界值為42 mut/Mb時陽性預測值95%，bTMB的陽性符合率(PPA)相對較低，為32%。在Ⅳ期標本中，cfDNA至少20 ng，bTMB的PPA提高到63%，panel減小到577 kb仍能達到63%的PPA。

研究者利用已有2.2 Mb的tTMB檢測panel對183例腫瘤組織樣本進行了分析，結(jié)果顯示tTMB檢測panel的TMB中位值高于TCGA數(shù)據(jù)庫中肺癌、腺癌和鱗癌樣本的全外顯子測序分析值(13.9 vs. 7.6)。研究者利用CAPP-Seq panel設(shè)計算法，致力于設(shè)計一款較小的且突變量最大化的用于肺TMB檢測的血漿panel，使每個樣本的檢測成本最小化。以覆蓋關(guān)鍵基因的約300 kb為核心，每次添加50 kb最終得到一個約1.1Mb的肺TMB檢測panel，覆蓋965個基因的外顯子區(qū)域。

研究者用這個bTMB panel對178份血漿樣本進行了分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)測序深度與cfDNA量密切相關(guān)，當cfDNA量大于30 ng時測序深度大于3000，提示該panel檢測突變準確度較高。

為了評估這一bTMB panel的臨床效能，研究者利用一個NSCLC患者隊列WES數(shù)據(jù)進行了in-silico模擬分析，結(jié)果顯示W(wǎng)ES界值(10 mut/Mb)轉(zhuǎn)換后相當于該panel的19.3 mut/Mb。

在有持久臨床獲益和無持久臨床獲益患者中，與WES相比，bTMB panel對兩類患者的區(qū)分效能更強，在對無進展生存的改善預測效果也更強。

為比較tTMB與bTMB，研究者用bTMB重新捕獲組織樣本，確定兩個panel的TMB值相關(guān)方程，tTMB panel中16 mut/Mb相對應(yīng)于bTMB的42 mut/Mb。用tTMB界值16 mut/Mb進一步評估血漿與腫瘤組織間TMB分類的一致性，發(fā)現(xiàn)bTMB panel檢測TMB-H的PPV較高(91%~100%)，提示血漿檢測準確性較好，但bTMB panel檢測TMB-H的PPA較低(24%~32%)，提示敏感度較低。研究者認為可能與早期或脫落率較低腫瘤所提取的cfDNA量少所致，cfDNA量增加，組織和血漿TMB的相關(guān)性增加，研究者建議cfDNA量要在20 ng以上，才能準確可重復地評估bTMB。

研究者分析了腫瘤負荷對bTMB效能的影響，發(fā)現(xiàn)腫瘤負荷大于0.1%等位基因頻率的樣本，組織和血漿TMB有較高的相關(guān)性。因腫瘤負荷與分期相關(guān)，研究者進一步對分期樣本進行了分析，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期的bTMB PPA為0、11%、35%、54%，在Ⅳ期患者樣本中，組織與血漿TMB相關(guān)性最強。在Ⅳ期、cfDNA>20 ng、tTMB界值為16 mut/Mb時，血漿高TMB患者的PPV和PPA分別為100%和63%。

研究者對設(shè)計的panel進行分析發(fā)現(xiàn)，與1.1 Mb的bTMB panel相比，至少約577 kb的panel有相似的檢測性能和臨床相關(guān)性。該研究設(shè)計的bTMB panel有較高的成本效益和檢測精度，有望成為篩選接受免疫療法的肺癌患者的預測標志物。

(編譯 蕭蕭)