復(fù)旦大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院胡夕春等發(fā)現(xiàn)，血漿核仁小RNA(snoRNA)SNORD33是三陰性乳腺癌(TNBC)鉑類藥物療效預(yù)測標(biāo)志物，還揭示了SNORD33調(diào)控鉑類耐藥相關(guān)分子機制。(Mol Cancer. 2022, 21: 22. DOI: 10.1186/s12943-022-01504-0)

研究者構(gòu)建了順鉑耐藥TNBC細胞株MDA-MB-231/DDP，其對順鉑的耐藥性是母代細胞株MDA-MB-231的5倍。通過RNA測序發(fā)現(xiàn)，共有277個RNA在MDA-MB-231/DDP細胞中異常表達，其中snoRNA的變異率最高(12.3%)。在所有變化的snoRNA中，SNORD33的變化最大，降低最為顯著。

研究者在MDA-MB-231、MDA-MB-468和SUM149PT細胞中沉默SNORD33的表達后，進行了細胞實驗，探討SNORD33對TNBC細胞功能的影響。

結(jié)果顯示，SNORD33敲除后，乳腺癌細胞的增殖能力增強，凋亡細胞顯著減少。在SNORD33敲除細胞中檢測到抗凋亡蛋白(Mcl-1和Bcl-2)水平顯著增加，促凋亡蛋白(活化caspase-3和caspase-9)表達降低，提示在順鉑耐藥的TNBC細胞中SNORD33表達顯著降低，下調(diào)SNORD33表達增強了TNBC細胞對順鉑的耐藥性。

在體外細胞功能實驗中，SNORD33對TNBC細胞順鉑耐藥性有影響，在TNBC患者血漿中的表達情況與患者預(yù)后的關(guān)系如何。研究者從3項臨床試驗中收集255例mTNBC患者血漿，其中一線化療方案不含鉑類藥物的45例，含鉑類藥物的209例(訓(xùn)練隊列81例，驗證隊列128例，聯(lián)合隊列209例中有114例隨機接受了BRCA 基因突變檢測)。

在訓(xùn)練隊列中，根據(jù)血漿中SNORD33表達水平，將81個樣本分為SNORD33高表達組和SNORD33低表達組，這兩組之間的基線特征基本持平。分析發(fā)現(xiàn)，低SNORD33組的無進展生存期(PFS)明顯短于高SNORD33組(6.6個月vs. 10.1個月)。在驗證隊列和組合隊列的分析結(jié)果與以上結(jié)論一致，低SNORD33組的PFS顯著縮短(驗證隊列：6.5個月vs. 10.1個月;聯(lián)合隊列：6.6個月 vs. 10.1個月)。

在聯(lián)合隊列中，與高SNORD33組相比，低SNORD33組總生存期(OS)顯著較短(22.2個月 vs. 40.6個月)。單因素Cox回歸分析顯示，SNORD33低表達、轉(zhuǎn)移灶數(shù)量、內(nèi)臟轉(zhuǎn)移和肝轉(zhuǎn)移與PFS和OS縮短顯著相關(guān)。在多因素分析顯示，SNORD33是鉑類化療PFS的獨立預(yù)測因素。

在三個研究隊列中，達到臨床療效(CB)患者的血漿SNORD33顯著高于未達到CB的患者。接受非鉑類化療患者血漿SNORD33水平的變化與PFS無關(guān)。提示SNORD33表達水平的預(yù)測值具有鉑類藥物特異性。目前研究最多的乳腺癌鉑敏感性生物標(biāo)志物BRCA突變狀態(tài)，與血漿SNORD33水平無關(guān)，與鉑類化療患者PFS無關(guān)。

ROC分析發(fā)現(xiàn)，與其他單一臨床病理風(fēng)險因素如肝轉(zhuǎn)移和轉(zhuǎn)移灶的數(shù)量相比，SNORD33血漿水平作為鉑類化療結(jié)果預(yù)測因子，具有更好的臨床應(yīng)用價值(AUC 0.652)。

研究者根據(jù)多因素Cox回歸模型中血漿SNORD33水平、肝轉(zhuǎn)移和轉(zhuǎn)移灶數(shù)量，繪制了預(yù)測含鉑方案PFS時間的列線陣圖，用于預(yù)測患者鉑類藥物治療不同時間臨床緩解可能性，預(yù)后列線圖所提供的這些信息可為臨床醫(yī)生選擇方案時提供重要的參考價值。

研究者對SNORD33影響鉑類耐藥的機制進行了探討。通過RNA拉下試驗結(jié)合質(zhì)譜分析，發(fā)現(xiàn)SNORD33通過阻止甲基化結(jié)合蛋白2(MeCP2)與甲基化CpG DNA的結(jié)合，來調(diào)節(jié)MeCP2靶向基因的表達。SNORD33表達下調(diào)可釋放MeCP2的轉(zhuǎn)錄抑制活性，進而抑制促凋亡基因表達，腫瘤細胞凋亡減少，增加TNBC細胞對鉑類的耐藥。

為了進一步證實以上結(jié)論，研究者在SNORD33敲除的TNBC細胞系中敲除MeCP2后發(fā)現(xiàn)，MeCP2下調(diào)減弱SNORD33基因敲除誘導(dǎo)的促凋亡蛋白減少和細胞凋亡，使抗凋亡蛋白表達增加，可部分逆轉(zhuǎn)TNBC細胞因SNORD33缺失而產(chǎn)生的鉑耐藥。

這些數(shù)據(jù)表明，SNORD33通過影響MeCP2與靶蛋白的結(jié)合調(diào)控凋亡相關(guān)基因的表達，進而影響細胞的凋亡，MeCP2被認為是SNORD33調(diào)控TNBC細胞鉑類耐藥的潛在靶點。

研究者成功構(gòu)建鉑類耐藥TNBC細胞株，通過RNA測序檢測表達異常的RNA，發(fā)現(xiàn)snoRNA，SNORD33;并通過一系列研究，證實SNORD33與TNBC細胞對順鉑的耐藥密切相關(guān)，進一步探索了血漿SNORD33在mTNBC患者中的表達情況及與患者預(yù)后的關(guān)系，并構(gòu)建了預(yù)測含鉑方案PFS時間的列線圖，最后還揭示了SNORD33影響鉑類耐藥的分子機制。 (編譯 于娜)