復(fù)旦大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院胡夕春等發(fā)現(xiàn)，血漿核仁小RNA(snoRNA)SNORD33是三陰性乳腺癌(TNBC)鉑類(lèi)藥物療效預(yù)測(cè)標(biāo)志物，還揭示了SNORD33調(diào)控鉑類(lèi)耐藥相關(guān)分子機(jī)制。(Mol Cancer. 2022, 21: 22. DOI: 10.1186/s12943-022-01504-0)

研究者構(gòu)建了順鉑耐藥TNBC細(xì)胞株MDA-MB-231/DDP，其對(duì)順鉑的耐藥性是母代細(xì)胞株MDA-MB-231的5倍。通過(guò)RNA測(cè)序發(fā)現(xiàn)，共有277個(gè)RNA在MDA-MB-231/DDP細(xì)胞中異常表達(dá)，其中snoRNA的變異率最高(12.3%)。在所有變化的snoRNA中，SNORD33的變化最大，降低最為顯著。

研究者在MDA-MB-231、MDA-MB-468和SUM149PT細(xì)胞中沉默SNORD33的表達(dá)后，進(jìn)行了細(xì)胞實(shí)驗(yàn)，探討SNORD33對(duì)TNBC細(xì)胞功能的影響。

結(jié)果顯示，SNORD33敲除后，乳腺癌細(xì)胞的增殖能力增強(qiáng)，凋亡細(xì)胞顯著減少。在SNORD33敲除細(xì)胞中檢測(cè)到抗凋亡蛋白(Mcl-1和Bcl-2)水平顯著增加，促凋亡蛋白(活化caspase-3和caspase-9)表達(dá)降低，提示在順鉑耐藥的TNBC細(xì)胞中SNORD33表達(dá)顯著降低，下調(diào)SNORD33表達(dá)增強(qiáng)了TNBC細(xì)胞對(duì)順鉑的耐藥性。

在體外細(xì)胞功能實(shí)驗(yàn)中，SNORD33對(duì)TNBC細(xì)胞順鉑耐藥性有影響，在TNBC患者血漿中的表達(dá)情況與患者預(yù)后的關(guān)系如何。研究者從3項(xiàng)臨床試驗(yàn)中收集255例mTNBC患者血漿，其中一線化療方案不含鉑類(lèi)藥物的45例，含鉑類(lèi)藥物的209例(訓(xùn)練隊(duì)列81例，驗(yàn)證隊(duì)列128例，聯(lián)合隊(duì)列209例中有114例隨機(jī)接受了BRCA 基因突變檢測(cè))。

在訓(xùn)練隊(duì)列中，根據(jù)血漿中SNORD33表達(dá)水平，將81個(gè)樣本分為SNORD33高表達(dá)組和SNORD33低表達(dá)組，這兩組之間的基線特征基本持平。分析發(fā)現(xiàn)，低SNORD33組的無(wú)進(jìn)展生存期(PFS)明顯短于高SNORD33組(6.6個(gè)月vs. 10.1個(gè)月)。在驗(yàn)證隊(duì)列和組合隊(duì)列的分析結(jié)果與以上結(jié)論一致，低SNORD33組的PFS顯著縮短(驗(yàn)證隊(duì)列：6.5個(gè)月vs. 10.1個(gè)月;聯(lián)合隊(duì)列：6.6個(gè)月 vs. 10.1個(gè)月)。

在聯(lián)合隊(duì)列中，與高SNORD33組相比，低SNORD33組總生存期(OS)顯著較短(22.2個(gè)月 vs. 40.6個(gè)月)。單因素Cox回歸分析顯示，SNORD33低表達(dá)、轉(zhuǎn)移灶數(shù)量、內(nèi)臟轉(zhuǎn)移和肝轉(zhuǎn)移與PFS和OS縮短顯著相關(guān)。在多因素分析顯示，SNORD33是鉑類(lèi)化療PFS的獨(dú)立預(yù)測(cè)因素。

在三個(gè)研究隊(duì)列中，達(dá)到臨床療效(CB)患者的血漿SNORD33顯著高于未達(dá)到CB的患者。接受非鉑類(lèi)化療患者血漿SNORD33水平的變化與PFS無(wú)關(guān)。提示SNORD33表達(dá)水平的預(yù)測(cè)值具有鉑類(lèi)藥物特異性。目前研究最多的乳腺癌鉑敏感性生物標(biāo)志物BRCA突變狀態(tài)，與血漿SNORD33水平無(wú)關(guān)，與鉑類(lèi)化療患者PFS無(wú)關(guān)。

ROC分析發(fā)現(xiàn)，與其他單一臨床病理風(fēng)險(xiǎn)因素如肝轉(zhuǎn)移和轉(zhuǎn)移灶的數(shù)量相比，SNORD33血漿水平作為鉑類(lèi)化療結(jié)果預(yù)測(cè)因子，具有更好的臨床應(yīng)用價(jià)值(AUC 0.652)。

研究者根據(jù)多因素Cox回歸模型中血漿SNORD33水平、肝轉(zhuǎn)移和轉(zhuǎn)移灶數(shù)量，繪制了預(yù)測(cè)含鉑方案PFS時(shí)間的列線陣圖，用于預(yù)測(cè)患者鉑類(lèi)藥物治療不同時(shí)間臨床緩解可能性，預(yù)后列線圖所提供的這些信息可為臨床醫(yī)生選擇方案時(shí)提供重要的參考價(jià)值。

研究者對(duì)SNORD33影響鉑類(lèi)耐藥的機(jī)制進(jìn)行了探討。通過(guò)RNA拉下試驗(yàn)結(jié)合質(zhì)譜分析，發(fā)現(xiàn)SNORD33通過(guò)阻止甲基化結(jié)合蛋白2(MeCP2)與甲基化CpG DNA的結(jié)合，來(lái)調(diào)節(jié)MeCP2靶向基因的表達(dá)。SNORD33表達(dá)下調(diào)可釋放MeCP2的轉(zhuǎn)錄抑制活性，進(jìn)而抑制促凋亡基因表達(dá)，腫瘤細(xì)胞凋亡減少，增加TNBC細(xì)胞對(duì)鉑類(lèi)的耐藥。

為了進(jìn)一步證實(shí)以上結(jié)論，研究者在SNORD33敲除的TNBC細(xì)胞系中敲除MeCP2后發(fā)現(xiàn)，MeCP2下調(diào)減弱SNORD33基因敲除誘導(dǎo)的促凋亡蛋白減少和細(xì)胞凋亡，使抗凋亡蛋白表達(dá)增加，可部分逆轉(zhuǎn)TNBC細(xì)胞因SNORD33缺失而產(chǎn)生的鉑耐藥。

這些數(shù)據(jù)表明，SNORD33通過(guò)影響MeCP2與靶蛋白的結(jié)合調(diào)控凋亡相關(guān)基因的表達(dá)，進(jìn)而影響細(xì)胞的凋亡，MeCP2被認(rèn)為是SNORD33調(diào)控TNBC細(xì)胞鉑類(lèi)耐藥的潛在靶點(diǎn)。

研究者成功構(gòu)建鉑類(lèi)耐藥TNBC細(xì)胞株，通過(guò)RNA測(cè)序檢測(cè)表達(dá)異常的RNA，發(fā)現(xiàn)snoRNA，SNORD33;并通過(guò)一系列研究，證實(shí)SNORD33與TNBC細(xì)胞對(duì)順鉑的耐藥密切相關(guān)，進(jìn)一步探索了血漿SNORD33在mTNBC患者中的表達(dá)情況及與患者預(yù)后的關(guān)系，并構(gòu)建了預(yù)測(cè)含鉑方案PFS時(shí)間的列線圖，最后還揭示了SNORD33影響鉑類(lèi)耐藥的分子機(jī)制。 (編譯 于娜)