同濟(jì)大學(xué)醫(yī)學(xué)院王萍、中國(guó)科學(xué)院上海有機(jī)化學(xué)研究所林亮等，合作開發(fā)了一種N-去糖基化靶向嵌合體（DGlyTAC），該技術(shù)通過(guò)將去糖基酶PNGF與特異性納米抗體或親和配體融合，實(shí)現(xiàn)對(duì)免疫檢查點(diǎn)蛋白、生長(zhǎng)因子受體等膜蛋白表面N-糖鏈的精準(zhǔn)剪除，從而阻斷其功能活性，有效破壞CD24/Siglec-10、PD-L1/PD-1等關(guān)鍵免疫調(diào)控通路，同時(shí)對(duì)整體細(xì)胞糖基化狀態(tài)影響極小，脫靶效應(yīng)低，安全性好。研究首次證明DGlyTAC能顯著抑制腫瘤生長(zhǎng)，且在針對(duì)PD-L1的小鼠腫瘤治療中，DGlyTAC優(yōu)于抗PD-L1抗體的抗腫瘤效果，毒性也更低。[Signal Transduct Target Ther. 2025; 10(1): 139. ]

針對(duì)免疫檢查點(diǎn)信號(hào)遏制腫瘤的免疫逃逸機(jī)制，是多種實(shí)體瘤治療的重要策略。占據(jù)目標(biāo)蛋白的結(jié)合位點(diǎn)可實(shí)現(xiàn)信號(hào)阻斷，直接清除也是一種策略，如蛋白降解靶向嵌合體技術(shù)（PROTAC），依賴細(xì)胞內(nèi)的泛素-蛋白酶體途徑實(shí)現(xiàn)對(duì)目標(biāo)蛋白的徹底清除。去除免疫檢查點(diǎn)蛋白的糖基化修飾亦可使其失活，去糖基化對(duì)免疫檢查點(diǎn)蛋白而言，雖不致死，但其功能已失。蛋白質(zhì)功能往往依賴多種翻譯后修飾，其中N-糖基化是細(xì)胞外表面廣泛存在的修飾，80%的細(xì)胞膜蛋白均攜帶N-糖鏈，參與調(diào)節(jié)細(xì)胞分化、細(xì)胞間通訊和蛋白穩(wěn)定性。免疫檢查點(diǎn)蛋白亦需要糖基化發(fā)揮作用，N-糖基修飾影響多種免疫檢查點(diǎn)受體-配體結(jié)合親和力和功能，幫助腫瘤細(xì)胞削弱免疫細(xì)胞的識(shí)別與攻擊，促進(jìn)免疫逃逸。已有研究顯示，阻斷腫瘤細(xì)胞表面的N-糖基化可增強(qiáng)CAR-T細(xì)胞的殺傷力。

研究者開發(fā)了DGlyTAC技術(shù)。DGlyTAC是一種靶向性N-糖基剪切工具，由去糖基酶PNGF與識(shí)別目標(biāo)蛋白的納米抗體/親和性配體融合而成。DGlyTAC不破壞蛋白本身，而是通過(guò)靶向修剪的方式實(shí)現(xiàn)特定蛋白失活。

研究者首先在表達(dá)結(jié)構(gòu)清晰、糖基化位點(diǎn)有限的CD24蛋白上驗(yàn)證了DGlyTAC的可行性。研究者使用CHO細(xì)胞系構(gòu)建了過(guò)表達(dá)CD24與熒光蛋白eGFP融合的細(xì)胞模型。結(jié)果顯示，直接添加PNGF需較高濃度（500?nM）才能去除eGFP-CD24的N-糖鏈，而將PNGF與識(shí)別eGFP的納米抗體nbGFP融合后，僅需5?nM的nbGFP-PNGF即可實(shí)現(xiàn)完全去糖基化，效率提升百倍，且對(duì)其他蛋白的糖基化影響極小，顯示DGlyTAC優(yōu)異的特異性與高效性。

經(jīng)過(guò)nbGFP-PNGF處理后，CD24與巨噬細(xì)胞表面的抑制性受體Siglec-10的結(jié)合能力下降，巨噬細(xì)胞對(duì)腫瘤細(xì)胞的吞噬效率提高，證實(shí)使用DGlyTAC技術(shù)對(duì)CD24進(jìn)行去糖基化可解除對(duì)免疫系統(tǒng)的抑制。這一策略同樣適用于別吃我信號(hào)通路CD47-SIRPα。研究者構(gòu)建了nbCD47-PNGF，在多種腫瘤細(xì)胞系中實(shí)現(xiàn)了CD47的去糖基化，顯著增強(qiáng)了其被巨噬細(xì)胞吞噬的能力，提示DGlyTAC可應(yīng)用于不同免疫逃逸通路的干預(yù)。

為驗(yàn)證DGlyTAC的普適性，研究者將該技術(shù)應(yīng)用到多種生長(zhǎng)因子受體如IGF1R、EGFR和HER2等，其膜定位及信號(hào)傳導(dǎo)依賴于N-糖基化修飾。結(jié)果顯示，通過(guò)分別與相應(yīng)親和體融合，DGlyTAC在多種腫瘤細(xì)胞系中能有效去除這些蛋白的部分糖基化修飾，導(dǎo)致蛋白分布位置發(fā)生改變?；蛞蜻@些蛋白較大且結(jié)構(gòu)復(fù)雜，DGlyTAC的去糖基化效率存在一定局限。

研究者于是聚焦免疫檢查點(diǎn)蛋白PD-L1，設(shè)計(jì)了針對(duì)人源與鼠源PD-L1的特異性DGlyTAC（nbhPDL1-PNGF和nbmPDL1-PNGF）。結(jié)果表明，DGlyTAC能幾乎完全去除PD-L1的N-糖基化修飾，在不影響其膜表達(dá)水平和穩(wěn)定性的情況下，顯著削弱PD-L1與PD-1的結(jié)合能力，去糖效果呈劑量依賴性，可將結(jié)合能力降低至原來(lái)的1/16。

研究者在乳腺癌（E0771）、結(jié)直腸癌（MC38）等小鼠腫瘤模型中驗(yàn)證了DGlyTAC的抗腫瘤效果。結(jié)果顯示，納米抗PD-1抗體本身只對(duì)腫瘤生長(zhǎng)有輕微抑制的效果。與抗PD-L1抗體、抗PD-1抗體或PNGF治療相比，DGlyTAC在抑制腫瘤生長(zhǎng)、延長(zhǎng)小鼠生存時(shí)間及增強(qiáng)腫瘤免疫微環(huán)境的CD8陽(yáng)性T細(xì)胞浸潤(rùn)方面表現(xiàn)更優(yōu)。藥代動(dòng)力學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，DGlyTAC可有效富集于腫瘤組織，修剪糖鏈的反應(yīng)主要限于腫瘤部位，無(wú)明顯器官毒性。

研究者開發(fā)的DGlyTAC技術(shù)是一種新穎而高效的蛋白特異性N-糖基化修飾去除方法，未來(lái)的臨床應(yīng)用前景不容小覷。它為研究蛋白糖基化修飾的功能提供了強(qiáng)大的研究工具。這種特異性高、脫靶效應(yīng)低的策略也為下一代腫瘤免疫治療提供了新的方向。未來(lái)需深入研究進(jìn)一步優(yōu)化DGlyTAC的體內(nèi)穩(wěn)定性，提高其對(duì)大型復(fù)雜蛋白的修飾效率。

（編譯 羅梓蕊）