西班牙研究者Bruno Paiva等報(bào)告，循環(huán)腫瘤細(xì)胞(CTC)在多發(fā)性骨髓瘤(MM)患者預(yù)后和分子圖譜分析中有新的作用，為將外周血標(biāo)本(PB)中CTC檢測整合進(jìn)入流式-分子診斷流程提供了理論依據(jù)。(摘要號 23)

對MM患者骨髓(BM)中分離出的腫瘤細(xì)胞進(jìn)行的大規(guī)模平行測序已經(jīng)證實(shí)，MM存在顯著的克隆異質(zhì)性，每例患者存在的中位亞克隆數(shù)為5個(gè)?？梢栽O(shè)想，MM中真實(shí)的克隆異質(zhì)性將會更高，因?yàn)镸M中BM浸潤通常是灶性的，單一BM標(biāo)本只是代表了整個(gè)BM成分的一小部分。因此，尚無研究嘗試液體活檢技術(shù)[例如，從患者外周血標(biāo)本(PB)檢測基因特征]是否可以幫助獲得更完整的MM克隆多態(tài)性圖譜。

另外，在治療過程中BM活檢不可能反復(fù)復(fù)查，也要求對MM患者開發(fā)一種創(chuàng)傷性較小的基因檢測方法。為了確定在MM患者中非侵襲性地檢測基因特征的整體實(shí)用性，明確CTC的突變圖譜能否反應(yīng)此類患者BM中漿細(xì)胞(PC)的克隆性，該研究使用多色流式細(xì)胞儀(MFC)對自PETHEMA/GEM2010MAS65研究中前瞻性入組50例新診斷有癥狀的MM患者，自Dana-Farber腫瘤研究入組64例緩解期/維持治療期復(fù)發(fā)的患者，均進(jìn)行了CTC計(jì)數(shù)。

全外顯子測序方面，研究者獲得了8例新診斷未治療患者的骨髓、CTC和生殖系T淋巴細(xì)胞。BM克隆性PC和CTC的外顯子測序倍數(shù)高達(dá)200倍，生殖系細(xì)胞為50倍。CTC進(jìn)行全基因組擴(kuò)增(WGA)，每份標(biāo)本建兩個(gè)獨(dú)立的基因文庫，隨后對每個(gè)副本進(jìn)行測序。對于WGA的標(biāo)本，僅使用在兩份平行文庫中都存在單核苷酸多態(tài)性(SNV)。

結(jié)果顯示：在研究CTC是否能夠成為MM患者基因特征檢測的、可靠的、非侵襲性手段之前，首先確定了它在不同疾病狀態(tài)的可行性。高敏MFC技術(shù)顯示，在40/50例(80%)新診斷的MM患者和71/130例(55%)復(fù)發(fā)或緩解期的患者中，多重測序檢出了CTC。

在CTC計(jì)數(shù)的預(yù)后價(jià)值方面，這40例PB CTC陽性的新診斷患者中有19例復(fù)發(fā)，中位進(jìn)展時(shí)間為31個(gè)月;而另外10例沒有檢出CTC的患者中僅有1例復(fù)發(fā)，中位進(jìn)展時(shí)間未達(dá)到(P=0.08)。隨后，對復(fù)發(fā)或緩解期患者進(jìn)行多次PB CTC的動態(tài)變化與預(yù)測預(yù)后關(guān)系的研究中發(fā)現(xiàn)，CTC計(jì)數(shù)增加和預(yù)后不良相關(guān)(P=0.01)，提示CTC的絕對量和變化趨勢對MM的預(yù)后都有意義。

在證實(shí)了CTC能夠在大部分MM患者中被穩(wěn)定檢出后，緊接著開展CTC的突變圖譜研究，并將其與該患者配對的BM克隆性PB對比。在同一例患者的BM和CTC中可分別檢出223項(xiàng)(中位值)SNV和118項(xiàng)(中位值)SNV。在配對BM和CTC中，發(fā)現(xiàn)體細(xì)胞多態(tài)性的一致性為79%。

值得一提的是，在檢測MM中常見特異突變(如KRAS、NRAS、BRAF等)時(shí)，13個(gè)基因總計(jì)存在18個(gè)非同義SNV(NS-SNV)，大部分NS-SNV能夠在同一患者的配對BM PC和CTC中同步檢出。不僅如此，研究還發(fā)現(xiàn)了若干個(gè)僅發(fā)生在CTC或BM克隆性PC中的獨(dú)特突變。其中，39個(gè)NS-SNV為CTC特異性的，多例患者的CTC中均可檢出4個(gè)基因(CR1、DPY19L2、TMPRSS13和HBG1)的6個(gè)NS-SNV。配對BM和PB腫瘤細(xì)胞與拷貝數(shù)量多樣性(CNV)模式存在顯著的相關(guān)性。

(編譯 王維達(dá) 審校 王亮 呂躍)

中山大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院 呂躍教授述評：

大家都知道，MM中BM浸潤通常是灶性的，單一BM標(biāo)本只是代表了整個(gè)BM成分的一小部分，仍然存在缺欠，盡管采取了多部位穿刺等的許多措施，但是如何真正解決仍然是個(gè)頭痛的問題。因此，是否使用液體活檢技術(shù)[例如，從患者外周血標(biāo)本(PB)檢測基因特征]能夠幫助獲得更完整的MM克隆多態(tài)性圖譜是一個(gè)方向。本研究研究確定了CTC在MM患者預(yù)后和分子圖譜分析中的新作用，是一個(gè)很好的開端。