意大利研究者Silvia Rasi等報告，彌漫大B細胞淋巴瘤(DLBCL)的細胞游離DNA(cfDNA)基因型具有以下作用：(1)在檢測DLBCL中>15%體細胞等位基因突變的準(zhǔn)確率上，與活檢組織基因型檢測的準(zhǔn)確率相當(dāng);(2)可以檢測出一些活檢組織上不存在的基因突變，這可能與一些突變在解剖學(xué)位置上遠離活檢例點有關(guān);(3)這是一種實時的、非侵入性的方式，可以用來追蹤治療耐藥基因的產(chǎn)生和演化。(摘要號 127)

在DLBCL的診斷、預(yù)后或者治療目標(biāo)中，實時基因型檢測的需求越來越迫切。由于DLBCL缺乏白血病階段，腫瘤的基因分型迄今仍依賴于組織活檢的診斷分析。cfDNA從腫瘤細胞脫落到血液中進而凋亡，可被作為腫瘤DNA的來源來檢測癌基因體細胞突變。血樣本對于實時監(jiān)測突變具有明顯的優(yōu)勢，此外，cfDNA代表著整個腫瘤的異質(zhì)性，所以可以采用非活檢部位的腫瘤細胞來檢測突變。為了采用血漿cfDNA追蹤DLBCL的基因表達譜，這項研究連續(xù)入組26例不同Ann Arbor分期(Ⅲ~Ⅳ期，共13例)和不同年齡調(diào)整的IPI評分(2~3分，13例)的DLBCL患者(>65歲者15例，男女比例為11:15)，在診斷時、R-CHOP治療過程中、治療結(jié)束時以及病情進展時收集患者血漿cfDNA。同時從粒細胞提取配對的正?；蚪MDNA，用于篩選基因多態(tài)性。該研究設(shè)計的靶向重測序板包括59個基因(207 kb)的編碼外顯子和剪接位點，這些基因都是成熟B細胞腫瘤中高突變的基因，這個測序集合被特異設(shè)計成允許>90%的DLBCL至少存在一個突變。超深度二代測序(NGS)在MiSeq(Illumina)公司進行(覆蓋率>2000×，包含>80%的目標(biāo)序列)，采用SepCap基因庫建庫策略(NimbleGen)。VarScan2的體細胞功能被用來誘導(dǎo)非同義體細胞突變，同時開發(fā)了一個嚴(yán)謹(jǐn)?shù)纳镄畔W(xué)程序用于濾除測序錯誤。這項研究包含樣本組和擴展組，樣本組中有17例患者，從其活檢組織中提取配對腫瘤DNA用來行超深度NGS建庫;擴展組中9例患者，都缺少活檢組織。

結(jié)果顯示：共76例cfDNA樣本(26例治療前，28例治療期間，18例治療結(jié)束時，4例疾病進展時)接受了評價。治療前cfDNA基因型揭示了已知的DLBCL相關(guān)基因突變(血漿的中位突變數(shù)為3168/ml，1.73~6.5×104/ml)，包括MLL2(33%)，TP53(25%)，CREBBP和TNFAIP3(21%)，EZH2、TBL1XR1、PIM1(17%)，B2M、BCL2、CARD11、CCND3、FBXW7和STAT6(13%)。

血漿cfDNA基因型和腫瘤組織基因組DNA結(jié)果相比較可以得出cfDNA診斷基因型的準(zhǔn)確性。配對血漿cfDNA的基因型可準(zhǔn)確檢測79%的腫瘤組織突變。大部分在cfDNA中未發(fā)現(xiàn)的突變在腫瘤活檢組織中低表達(中位等位基因豐度為5.7%，0.8%~54%)。同樣，ROC分析結(jié)果顯示，如果腫瘤組織中>15%的等位基因突變，cfDNA基因型具有最高的靈敏度(92%)。

血漿cfDNA基因型還揭示了其他一些體細胞突變(<2/人，1~6/人)，這些在活檢組織中未被檢測到，包括一些臨床相關(guān)的基因突變。縱向分析DLBCL經(jīng)R-CHOP治療的血漿樣本，結(jié)果顯示對治療反應(yīng)較好的患者在1個療程后cfDNA的一些突變消失了。而在對R-CHOP抵抗的患者中，cfDNA中常見的DLBCL突變?nèi)源嬖?。此外，對于治療抵抗的患者，cfDNA出現(xiàn)了新的突變，推測在治療過程中克隆演化出一些耐藥基因。

(編譯 劉成成 審校 王亮 呂躍)

中山大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院 呂躍教授述評：

細胞游離DNA(cfDNA)的檢測正在不斷的應(yīng)用于腫瘤診斷和腫瘤治療的監(jiān)測，被稱之為液體活檢。淋巴瘤的治療的腫瘤細胞監(jiān)測一直是個難題，液體活檢的發(fā)展，有望對解決這一問題提供幫助。