腫瘤免疫療法兩大主力無疑為免疫檢查點(diǎn)抑制劑和CAR-T，但兩種免疫療法都有不盡如人意之處，CAR-T在血液系統(tǒng)腫瘤治療頗有建樹，但實(shí)體瘤治療方面還差強(qiáng)人意，而免疫檢查點(diǎn)抑制劑可增強(qiáng)免疫系統(tǒng)功能，在治療實(shí)體瘤上頗有成效，但會(huì)帶來嚴(yán)重的免疫相關(guān)不良反應(yīng)，二者能否聯(lián)合呢?

美國紀(jì)念斯隆凱特琳癌癥中心研究者成功地使得二代CAR-T細(xì)胞分泌PD-1抗體單鏈可變區(qū)片段(scFv)，同時(shí)提高自身和腫瘤環(huán)境中T細(xì)胞的抗癌活性，抗腫瘤治療效果甚至比CAR-T聯(lián)合PD-1抗體的治療效果更好。這些scFv局限分泌在腫瘤附近，基本不進(jìn)入血液循環(huán)，令CAR-T抗腫瘤活性更高更持久的同時(shí)，保證了較低的副作用。(Nat Biotechnol. 2018 年8月13日在線版. doi: 10.1038/nbt.4195)

結(jié)合CAR-T和免疫檢查點(diǎn)抑制劑并不容易，細(xì)胞上添加額外蛋白直接加PD-1抗體比較困難，于是研究者選擇了PD-1抗體可變區(qū)的片段，類似迷你PD-1抗體，也可很好地結(jié)合PD-1，避免腫瘤細(xì)胞逃脫T細(xì)胞的免疫監(jiān)視。

研究者首先構(gòu)建了小鼠用的這種裝甲CAR-T，選擇了CD19和MUC16兩種腫瘤特異性抗原(前者常出現(xiàn)于血液系統(tǒng)腫瘤中，后者是卵巢癌和胰腺癌的分子標(biāo)志)，結(jié)合小鼠CD28和CD3zeta，成功制成兩種CAR-T細(xì)胞19m28mZ和4H11m28mZ，并加上了挑選出的scFv——RMP1-14。

研究者在小鼠卵巢癌模型中嘗試了這兩種裝甲CAR-T，同時(shí)對(duì)比了普通CAR-T聯(lián)合直接注射scFv的組合療法，發(fā)現(xiàn)裝甲CAR-T的治療效果優(yōu)于單獨(dú)使用普通CAR-T，與CAR-T聯(lián)合scFv效果類似。

在腫瘤接種120天時(shí)，小鼠體內(nèi)仍可檢測到裝甲CAR-T細(xì)胞。受到免疫檢查點(diǎn)抑制劑鼓舞效果增強(qiáng)的不只裝甲CAR-T，腫瘤微環(huán)境中的普通T細(xì)胞也受到鼓舞，表達(dá)的CD80、CD107α、IFN-γ、顆粒酶B等與抗腫瘤活性相關(guān)的細(xì)胞因子水平都上升。

在小鼠中獲得初步成功后，研究者篩選了人源的PD-1抗體片段，鎖定表現(xiàn)最穩(wěn)定的E27片段，成功構(gòu)建了人源的裝甲CAR-T。人源裝甲CAR-T表現(xiàn)與小鼠裝甲CAR-T一致，可很好地結(jié)合并有效抑制PD-1，在與腫瘤細(xì)胞共培養(yǎng)過程中，表現(xiàn)出比普通CAR-T更好的增殖能力。

在淋巴瘤和卵巢癌小鼠模型中，人源化裝甲CAR-T均表現(xiàn)出比普通CAR-T更好的療效，小鼠存活期大大延長，裝甲CAR-T比普通CAR-T聯(lián)合PD-1抗體表現(xiàn)出更好的療效。

研究者檢測了小鼠體內(nèi)的PD-1抗體和scFv的去向，通過熒光成像看到PD-1抗體注射到小鼠體內(nèi)后很快擴(kuò)散至全身，而scFv因是CAR-T分泌，基本保持在腫瘤內(nèi)，未在小鼠血液中檢測到scFv，說明scFv較少或基本不進(jìn)入血循環(huán)，意味著抑制免疫檢查點(diǎn)帶來的全身不良反應(yīng)將大大減少。

該方法為CAR-T研究提供了新的思路，可建立分泌不同分子的CAR-T，根據(jù)患者需求量身打造。免疫檢查點(diǎn)除了PD-1，還有CTLA-4、LAG-3、TIM-3等，這些都是未來可能被添加到CAR-T上的新裝備。研究者正在設(shè)計(jì)臨床試驗(yàn)，希望這些裝甲CAR-T可以在腫瘤治療中一展拳腳。

(編譯 王微微)