澳大利亞Peter MacCallum癌癥中心Chen等，基于CRISPR基因編輯技術，篩選到在腫瘤內特異性啟動基因表達的兩個啟動子，將二者分別與促炎因子基因整合，實現(xiàn)了通過腫瘤內源性調控機制驅動CAR-T基因表達，實現(xiàn)在腫瘤局部精準遞送免疫因子的策略，且不會產生明顯毒副作用的目的，為提高CAR-T細胞治療實體瘤的安全性和療效開辟了蹊徑。（Nature. 2025年7月2日在線版）

CAR-T療法已在血液系統(tǒng)惡性腫瘤治療中取得成效，但在實體瘤治療中療效受制于腫瘤微環(huán)境的免疫抑制和腫瘤抗原的高度異質性。為增強CAR-T殺滅腫瘤細胞的能力，研究者曾嘗試讓CAR-T細胞額外分泌促炎因子如IL-12和IL-2，但傳統(tǒng)做法易引發(fā)外周毒性，限制臨床應用。

為解決這一難題，研究者創(chuàng)新性設計了CRISPR敲入策略，將細胞因子基因精確插入CAR-T細胞內源性、對腫瘤高度特異的啟動子區(qū)域。通過系統(tǒng)篩選，研究者發(fā)現(xiàn)NR4A2和RGS16啟動子可在腫瘤環(huán)境中選擇性激活，使得可僅在腫瘤部位局部表達所需細胞因子，顯著減少外周毒性風險。

實驗結果顯示，攜帶該設計的CAR-T細胞可在多種小鼠模型中顯著提高抗腫瘤活性，延長小鼠存活時間，激活內源性腫瘤免疫，改善細胞多功能性，并保持良好的安全性。這一策略同樣適用于來自患者的自體CAR-T細胞，提示該策略具有較強的臨床應用潛力。

研究者基于CRISPR基因編輯技術，構建了一個性能良好的啟動子篩選系統(tǒng)。之后對比了腫瘤浸潤CAR-T細胞和脾臟中CAR-T細胞的基因表達差異，發(fā)現(xiàn)了27個在腫瘤中顯著上調表達的基因。

經過篩選，最終鎖定7個基因。在經過CRISPR加持的啟動子篩選系統(tǒng)測試后，NR4A2和RGS16兩個基因勝出，尤其是NR4A2，該基因表現(xiàn)出嚴格的腫瘤限制性表達，且可讓目標基因在瘤內高水平表達。

基于小鼠模型的研究結果表明，整合了NR4A2/IL-12的CAR-T細胞表現(xiàn)出顯著增強的療效，即使使用較低劑量也能維持這種療效。且與對照組相比，用NR4A2/IL-12 CAR-T細胞治療的小鼠未觀察到毒性。

研究者將其設計的CAR-T細胞與傳統(tǒng)設計方案做了比較，發(fā)現(xiàn)與傳統(tǒng)方案相比，NR4A2的啟動子支持更嚴格的腫瘤限制性轉基因表達，瘤外表達水平僅有傳統(tǒng)方案的20%左右?；谛∈竽[瘤模型的研究，也證實NR4A2的啟動子更優(yōu)。

不過，適合IL-12的NR4A2啟動子，不太適合IL-2。NR4A2/IL-2的CAR-T細胞，控制腫瘤的能力較差。對于促炎因子IL-2而言，RGS16的啟動子更優(yōu)，與NR4A2/IL-2 CAR-T細胞相比，RGS16/IL-2 CAR-T細胞表現(xiàn)出更高的IL-2表達和優(yōu)異的抗腫瘤效果，也未觀察到毒性，提示RGS16啟動子適合驅動IL-2等細胞因子的腫瘤內表達。

在腫瘤患者的腫瘤內，浸潤T細胞的NR4A2和RGS16是否也存在特異性表達的特征。研究者在分析多個公開數(shù)據(jù)庫的scRNA測序數(shù)據(jù)后發(fā)現(xiàn)，在多種腫瘤中，瘤內表達NR4A2和RGS16的T細胞的頻率，高于外周血中的T細胞頻率。提示研究者的這一設計有臨床價值，且有跨瘤種治療的潛力。

該研究率先提出了篩選瘤內特異性表達啟動子的方法，為未來的相關研究提供了參考，并找到了兩個能讓T細胞IL-2和IL-12在瘤內特異性表達的啟動子，為CAR-T細胞提供了更精準安全的遞送方案，有望打破實體瘤CAR-T療法瓶頸，有望與其他免疫療法聯(lián)合使用，提高治療實體瘤的療效。

（編譯 張瑞軒）