京腫科字﹝2007﹞33號

一、總則

腫瘤標本的規(guī)范收集和科學(xué)管理是研究腫瘤發(fā)生、發(fā)展過程以及臨床療效評估的重要保證。北京大學(xué)臨床腫瘤學(xué)院(即北京腫瘤醫(yī)院、北京市腫瘤防治研究所)標本庫通過規(guī)范化的手段獲得完整、高質(zhì)量的腫瘤組織標本，并予以規(guī)范化的分裝、儲存、定期質(zhì)檢和進行可靠的電子化數(shù)據(jù)管理。針對部分組織、血液樣本進行有計劃的二次開發(fā)，樣本開發(fā)過程中對樣本質(zhì)量進行大致評價，進行樣本質(zhì)量的監(jiān)控，提高樣本的利用率。

北京大學(xué)臨床腫瘤學(xué)院標本庫屬全院所有，向全院科研工作開放。標本庫為全院的基礎(chǔ)和臨床研究提供可靠的資源保障，為促進與提升我院的科研發(fā)展與科研水平服務(wù)。

二、標本庫的管理與人員組成

標本庫作為獨立科室隸屬科研處。標本庫設(shè)主任1人，負責標本的運行和日常管理。同時由5人組成組織標本管理委員會(基礎(chǔ)2人，臨床3人)，負責審核重要標本的使用申請和相關(guān)爭端的解決，協(xié)商標本庫發(fā)展、建設(shè)的規(guī)劃等相應(yīng)事宜。

標本庫的工作接受院學(xué)術(shù)委員會的監(jiān)督、指導(dǎo)和宏觀管理，定期(暫定半年)向?qū)W術(shù)委員會匯報工作。

標本庫暫定專職人員3人，其中2人負責樣本的采集、分裝、儲存以及相關(guān)數(shù)據(jù)的錄入，1人負責樣本的二次加工以及質(zhì)量控制。必要時可根據(jù)發(fā)展需要及工作量進行調(diào)整或聘用臨時人員。

三、標本庫的職能

標本庫的基本職能主要為五大部分：樣本的采集、分裝、儲存以及相關(guān)數(shù)據(jù)的錄入;樣本的二次開發(fā);樣本質(zhì)量的監(jiān)控;申請的審核以及標本的提供;樣本使用的后期監(jiān)督。在滿足基本職能的基礎(chǔ)上，標本庫也可參與標本相關(guān)技術(shù)服務(wù)與研究，例如提供標本提取技術(shù)平臺;承擔組織庫技術(shù)人員的專業(yè)技術(shù)培訓(xùn)，向其它相關(guān)單位提供操作規(guī)范和常用技術(shù);收集、保護和提供常見原代和傳代腫瘤細胞株;制作組織芯片;收集其他正常的器官組織以及稀有腫瘤組織等等。

(一)樣本的采集、分裝、儲存以及相關(guān)數(shù)據(jù)的錄入

收集的標本包括血液以及組織。

1)血液樣本的采集與分裝

由手術(shù)室、內(nèi)外科病房等相關(guān)科室配合進行。應(yīng)當由受過培訓(xùn)的人員來采集病人的血樣。在每次治療前進行全血采集。始終遵循標準防護方法，所有操作均要戴手套。在靜脈抽血時，應(yīng)當使用一次性的安全真空采血管取代傳統(tǒng)的針頭和注射器，可以使血液直接采集到帶塞的運輸管中。用完后自動廢棄針頭。

血液標本最少為10ml, 分裝為兩管，一份入抗凝管(淡紫色管蓋)分離血漿用，一份入非抗凝管(紅色管蓋)分離血清用。在室溫存放時間一般不超過30分鐘， 4℃低轉(zhuǎn)速1500-2000 rpm離心10-15 min，分離血清/血漿和血細胞。按照每管100 μl分裝于離心管，盡快(離體后4小時內(nèi))置于-70℃深低溫冰箱中作長期保存。

2)組織樣本的采集與分裝分離

組織樣本采集主要來源于外科手術(shù)切除的、或活檢等方式取材的正常、良性和惡性腫瘤組織。分離組織部位必須不影響臨床病理診斷取材。常規(guī)先對大體組織進行常規(guī)拍照，組織樣本按照大約1立方厘米大小進行分割后，應(yīng)該盡快凍存于液氮或放置于干冰上，再轉(zhuǎn)移到-70℃冰箱作長期保存。

3)數(shù)據(jù)庫的建設(shè)與相關(guān)數(shù)據(jù)的錄入

由于新的數(shù)據(jù)庫的完善還需要一個過程，在新的數(shù)據(jù)庫建立之前，仍使用原有的數(shù)據(jù)系統(tǒng)?，F(xiàn)有條件下，對樣本的病例號等簡單信息進行錄入，以便于今后查詢以及在今后提供樣本時同時提供給研究者。

(二)樣本的二次開發(fā)

樣本的二次加工主要是為了提高樣本利用率及方便研究者的工作。由于加工后的樣本需要滿足不同研究的需要，同時又需要減少因加工步驟過多而產(chǎn)生的損失和關(guān)于樣本質(zhì)量的爭議，因此暫時規(guī)定如下(也可在必要時按照需求進行調(diào)整)：

1) 首先要保證仍留有足夠量的組織和血液樣本以備研究者進行特殊類型標本加工要求的需要;

2) 全血DNA：提取的DNA存放于TE中，標準化為1mg/ml，提供OD260/280數(shù)值以及電泳圖片;按照每管10μg進行分裝;

組織DNA：提取的DNA存放于TE中，標準化為1mg/ml，提供OD260/280數(shù)值以及電泳圖片;按照每管10μg進行分裝;

組織RNA：提取的總RNA存放于含DEPC的去離子水中，標準化為1mg/ml，提供OD260/280數(shù)值以及電泳圖片;按照每管10μg進行分裝;也可以根據(jù)需要在此后加入3倍于原體積的無水乙醇使核酸沉淀作為存放方式;

組織總蛋白：提取的總蛋白以蛋白顆粒(pellet)的形式存放于醇類溶液中，以滿足可能的Western blot，2D IEF以及Trypsin Digestion后蛋白ID鑒定的需要。(此部分由于樣本有限，使用需經(jīng)管理委員會審批。)

(三)樣本質(zhì)量的監(jiān)控

總RNA和基因組DNA樣本應(yīng)附有瓊脂糖凝膠電泳圖，RNA樣本OD260/OD280應(yīng)在1.7～2.0之間，28S、18S RNA保持完整，無降解。DNA樣本OD260/OD280在1.6～1.8，電泳圖像顯示有高分子量的核酸片段。蛋白質(zhì)量的判斷暫時以對應(yīng)RNA完整性作為判斷依據(jù)。定期對不同存放時間的標本進行抽樣質(zhì)檢。抽樣質(zhì)檢應(yīng)包含各存放時期的標本，檢測過程可由標本處理室開展，也可定期每二個月收集各標本使用機構(gòu)的檢測結(jié)果，以使質(zhì)檢更為客觀。

(四)申請的審核以及標本的提供

標本庫標本的使用以科研為目的，如果有研究者出于商業(yè)目的使用標本，需要經(jīng)過管理委員會批準，擬按10倍于正常收費標準收費。申請人進行的課題研究本身必須通過倫理道德委員會的批準并在使用標本前提供相關(guān)批件。然后按照有關(guān)程序提出申請，經(jīng)過批準后方可使用。對于需求例數(shù)大于20例和醫(yī)院的重要標本，需要通過標本庫管理委員會討論決定。標本庫標本實行有償使用原則。

(五)樣本使用的后期監(jiān)督

樣本的使用人有義務(wù)向標本庫管理委員會反饋標本的使用情況，標本庫管理委員會有權(quán)利詢問標本的使用情況，以防止濫用標本。樣本的使用人在不影響其研究利益的情況下，應(yīng)積極配合提供研究結(jié)果，以避免其它研究者進行同一樣本的重復(fù)研究。使用標本的部門需要在標本庫管理委員會備案，每年向委員會匯報一次標本使用情況，并反饋研究結(jié)果。

四、標本庫的經(jīng)費來源及管理

標本庫在財務(wù)處設(shè)立獨立帳戶，?？顚Ｓ谩?/p>

申請院外專項經(jīng)費是用于建立標本庫經(jīng)費的主要來源。根據(jù)需要每年可從所內(nèi)基金中撥出一定的款項以保證標本庫的運行。通過有償服務(wù)是標本庫經(jīng)費來源的重要補充。普通標本每份40元，RNA、DNA標本每份60元，cDNA標本每份80元。需標本庫專門收集的標本，或者其它特殊加工產(chǎn)物，費用需與標本庫協(xié)商確定。如果有研究者出于商業(yè)目的使用標本，需要經(jīng)過管理委員會批準，按10倍于正常收費標準收費。標本庫經(jīng)費主要用于標本使用過程的消耗和再建設(shè)。

附件目錄

1. 標本采集的一般流程

2. 腫瘤組織標本使用的規(guī)定

3. 標本庫腫瘤標本使用協(xié)議書

4. 標本庫標本申請書

5. 樣本二次加工實施細則

6. 標本庫專用數(shù)據(jù)庫

7. 知情同意書

北京大學(xué)臨床腫瘤學(xué)院

二OO七年四月二十日