京腫科字﹝2007﹞33號(hào)

一、總則

腫瘤標(biāo)本的規(guī)范收集和科學(xué)管理是研究腫瘤發(fā)生、發(fā)展過程以及臨床療效評(píng)估的重要保證。北京大學(xué)臨床腫瘤學(xué)院(即北京腫瘤醫(yī)院、北京市腫瘤防治研究所)標(biāo)本庫通過規(guī)范化的手段獲得完整、高質(zhì)量的腫瘤組織標(biāo)本，并予以規(guī)范化的分裝、儲(chǔ)存、定期質(zhì)檢和進(jìn)行可靠的電子化數(shù)據(jù)管理。針對(duì)部分組織、血液樣本進(jìn)行有計(jì)劃的二次開發(fā)，樣本開發(fā)過程中對(duì)樣本質(zhì)量進(jìn)行大致評(píng)價(jià)，進(jìn)行樣本質(zhì)量的監(jiān)控，提高樣本的利用率。

北京大學(xué)臨床腫瘤學(xué)院標(biāo)本庫屬全院所有，向全院科研工作開放。標(biāo)本庫為全院的基礎(chǔ)和臨床研究提供可靠的資源保障，為促進(jìn)與提升我院的科研發(fā)展與科研水平服務(wù)。

二、標(biāo)本庫的管理與人員組成

標(biāo)本庫作為獨(dú)立科室隸屬科研處。標(biāo)本庫設(shè)主任1人，負(fù)責(zé)標(biāo)本的運(yùn)行和日常管理。同時(shí)由5人組成組織標(biāo)本管理委員會(huì)(基礎(chǔ)2人，臨床3人)，負(fù)責(zé)審核重要標(biāo)本的使用申請(qǐng)和相關(guān)爭(zhēng)端的解決，協(xié)商標(biāo)本庫發(fā)展、建設(shè)的規(guī)劃等相應(yīng)事宜。

標(biāo)本庫的工作接受院學(xué)術(shù)委員會(huì)的監(jiān)督、指導(dǎo)和宏觀管理，定期(暫定半年)向?qū)W術(shù)委員會(huì)匯報(bào)工作。

標(biāo)本庫暫定專職人員3人，其中2人負(fù)責(zé)樣本的采集、分裝、儲(chǔ)存以及相關(guān)數(shù)據(jù)的錄入，1人負(fù)責(zé)樣本的二次加工以及質(zhì)量控制。必要時(shí)可根據(jù)發(fā)展需要及工作量進(jìn)行調(diào)整或聘用臨時(shí)人員。

三、標(biāo)本庫的職能

標(biāo)本庫的基本職能主要為五大部分：樣本的采集、分裝、儲(chǔ)存以及相關(guān)數(shù)據(jù)的錄入;樣本的二次開發(fā);樣本質(zhì)量的監(jiān)控;申請(qǐng)的審核以及標(biāo)本的提供;樣本使用的后期監(jiān)督。在滿足基本職能的基礎(chǔ)上，標(biāo)本庫也可參與標(biāo)本相關(guān)技術(shù)服務(wù)與研究，例如提供標(biāo)本提取技術(shù)平臺(tái);承擔(dān)組織庫技術(shù)人員的專業(yè)技術(shù)培訓(xùn)，向其它相關(guān)單位提供操作規(guī)范和常用技術(shù);收集、保護(hù)和提供常見原代和傳代腫瘤細(xì)胞株;制作組織芯片;收集其他正常的器官組織以及稀有腫瘤組織等等。

(一)樣本的采集、分裝、儲(chǔ)存以及相關(guān)數(shù)據(jù)的錄入

收集的標(biāo)本包括血液以及組織。

1)血液樣本的采集與分裝

由手術(shù)室、內(nèi)外科病房等相關(guān)科室配合進(jìn)行。應(yīng)當(dāng)由受過培訓(xùn)的人員來采集病人的血樣。在每次治療前進(jìn)行全血采集。始終遵循標(biāo)準(zhǔn)防護(hù)方法，所有操作均要戴手套。在靜脈抽血時(shí)，應(yīng)當(dāng)使用一次性的安全真空采血管取代傳統(tǒng)的針頭和注射器，可以使血液直接采集到帶塞的運(yùn)輸管中。用完后自動(dòng)廢棄針頭。

血液標(biāo)本最少為10ml, 分裝為兩管，一份入抗凝管(淡紫色管蓋)分離血漿用，一份入非抗凝管(紅色管蓋)分離血清用。在室溫存放時(shí)間一般不超過30分鐘， 4℃低轉(zhuǎn)速1500-2000 rpm離心10-15 min，分離血清/血漿和血細(xì)胞。按照每管100 μl分裝于離心管，盡快(離體后4小時(shí)內(nèi))置于-70℃深低溫冰箱中作長(zhǎng)期保存。

2)組織樣本的采集與分裝分離

組織樣本采集主要來源于外科手術(shù)切除的、或活檢等方式取材的正常、良性和惡性腫瘤組織。分離組織部位必須不影響臨床病理診斷取材。常規(guī)先對(duì)大體組織進(jìn)行常規(guī)拍照，組織樣本按照大約1立方厘米大小進(jìn)行分割后，應(yīng)該盡快凍存于液氮或放置于干冰上，再轉(zhuǎn)移到-70℃冰箱作長(zhǎng)期保存。

3)數(shù)據(jù)庫的建設(shè)與相關(guān)數(shù)據(jù)的錄入

由于新的數(shù)據(jù)庫的完善還需要一個(gè)過程，在新的數(shù)據(jù)庫建立之前，仍使用原有的數(shù)據(jù)系統(tǒng)。現(xiàn)有條件下，對(duì)樣本的病例號(hào)等簡(jiǎn)單信息進(jìn)行錄入，以便于今后查詢以及在今后提供樣本時(shí)同時(shí)提供給研究者。

(二)樣本的二次開發(fā)

樣本的二次加工主要是為了提高樣本利用率及方便研究者的工作。由于加工后的樣本需要滿足不同研究的需要，同時(shí)又需要減少因加工步驟過多而產(chǎn)生的損失和關(guān)于樣本質(zhì)量的爭(zhēng)議，因此暫時(shí)規(guī)定如下(也可在必要時(shí)按照需求進(jìn)行調(diào)整)：

1) 首先要保證仍留有足夠量的組織和血液樣本以備研究者進(jìn)行特殊類型標(biāo)本加工要求的需要;

2) 全血DNA：提取的DNA存放于TE中，標(biāo)準(zhǔn)化為1mg/ml，提供OD260/280數(shù)值以及電泳圖片;按照每管10μg進(jìn)行分裝;

組織DNA：提取的DNA存放于TE中，標(biāo)準(zhǔn)化為1mg/ml，提供OD260/280數(shù)值以及電泳圖片;按照每管10μg進(jìn)行分裝;

組織RNA：提取的總RNA存放于含DEPC的去離子水中，標(biāo)準(zhǔn)化為1mg/ml，提供OD260/280數(shù)值以及電泳圖片;按照每管10μg進(jìn)行分裝;也可以根據(jù)需要在此后加入3倍于原體積的無水乙醇使核酸沉淀作為存放方式;

組織總蛋白：提取的總蛋白以蛋白顆粒(pellet)的形式存放于醇類溶液中，以滿足可能的Western blot，2D IEF以及Trypsin Digestion后蛋白ID鑒定的需要。(此部分由于樣本有限，使用需經(jīng)管理委員會(huì)審批。)

(三)樣本質(zhì)量的監(jiān)控

總RNA和基因組DNA樣本應(yīng)附有瓊脂糖凝膠電泳圖，RNA樣本OD260/OD280應(yīng)在1.7～2.0之間，28S、18S RNA保持完整，無降解。DNA樣本OD260/OD280在1.6～1.8，電泳圖像顯示有高分子量的核酸片段。蛋白質(zhì)量的判斷暫時(shí)以對(duì)應(yīng)RNA完整性作為判斷依據(jù)。定期對(duì)不同存放時(shí)間的標(biāo)本進(jìn)行抽樣質(zhì)檢。抽樣質(zhì)檢應(yīng)包含各存放時(shí)期的標(biāo)本，檢測(cè)過程可由標(biāo)本處理室開展，也可定期每二個(gè)月收集各標(biāo)本使用機(jī)構(gòu)的檢測(cè)結(jié)果，以使質(zhì)檢更為客觀。

(四)申請(qǐng)的審核以及標(biāo)本的提供

標(biāo)本庫標(biāo)本的使用以科研為目的，如果有研究者出于商業(yè)目的使用標(biāo)本，需要經(jīng)過管理委員會(huì)批準(zhǔn)，擬按10倍于正常收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)收費(fèi)。申請(qǐng)人進(jìn)行的課題研究本身必須通過倫理道德委員會(huì)的批準(zhǔn)并在使用標(biāo)本前提供相關(guān)批件。然后按照有關(guān)程序提出申請(qǐng)，經(jīng)過批準(zhǔn)后方可使用。對(duì)于需求例數(shù)大于20例和醫(yī)院的重要標(biāo)本，需要通過標(biāo)本庫管理委員會(huì)討論決定。標(biāo)本庫標(biāo)本實(shí)行有償使用原則。

(五)樣本使用的后期監(jiān)督

樣本的使用人有義務(wù)向標(biāo)本庫管理委員會(huì)反饋標(biāo)本的使用情況，標(biāo)本庫管理委員會(huì)有權(quán)利詢問標(biāo)本的使用情況，以防止濫用標(biāo)本。樣本的使用人在不影響其研究利益的情況下，應(yīng)積極配合提供研究結(jié)果，以避免其它研究者進(jìn)行同一樣本的重復(fù)研究。使用標(biāo)本的部門需要在標(biāo)本庫管理委員會(huì)備案，每年向委員會(huì)匯報(bào)一次標(biāo)本使用情況，并反饋研究結(jié)果。

四、標(biāo)本庫的經(jīng)費(fèi)來源及管理

標(biāo)本庫在財(cái)務(wù)處設(shè)立獨(dú)立帳戶，?？顚Ｓ?。

申請(qǐng)?jiān)和鈱ｍ?xiàng)經(jīng)費(fèi)是用于建立標(biāo)本庫經(jīng)費(fèi)的主要來源。根據(jù)需要每年可從所內(nèi)基金中撥出一定的款項(xiàng)以保證標(biāo)本庫的運(yùn)行。通過有償服務(wù)是標(biāo)本庫經(jīng)費(fèi)來源的重要補(bǔ)充。普通標(biāo)本每份40元，RNA、DNA標(biāo)本每份60元，cDNA標(biāo)本每份80元。需標(biāo)本庫專門收集的標(biāo)本，或者其它特殊加工產(chǎn)物，費(fèi)用需與標(biāo)本庫協(xié)商確定。如果有研究者出于商業(yè)目的使用標(biāo)本，需要經(jīng)過管理委員會(huì)批準(zhǔn)，按10倍于正常收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)收費(fèi)。標(biāo)本庫經(jīng)費(fèi)主要用于標(biāo)本使用過程的消耗和再建設(shè)。

附件目錄

1. 標(biāo)本采集的一般流程

2. 腫瘤組織標(biāo)本使用的規(guī)定

3. 標(biāo)本庫腫瘤標(biāo)本使用協(xié)議書

4. 標(biāo)本庫標(biāo)本申請(qǐng)書

5. 樣本二次加工實(shí)施細(xì)則

6. 標(biāo)本庫專用數(shù)據(jù)庫

7. 知情同意書

北京大學(xué)臨床腫瘤學(xué)院

二OO七年四月二十日